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猪甲状腺细胞培养的实验注意事项
点击次数:2005 发布日期:2019-7-3  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
猪甲状腺细胞培养实验步骤
一、实验步骤
1. 杀猪后迅速取出甲状腺 1~2 个,置于盛有 75%酒精的烧杯中,用冰盒送至实验室(1 h 以内)。
 
2. 立即置于pH为7.4 的PBS缓冲液(含青链霉素)中,反复漂洗,直至漂洗液清澈透明。
 
3. 去除包膜及结缔组织,用眼科剪子、镊子将甲状腺组织剪成1mm3 大小的碎块。
 
4. 置含0.25%胰酶和300 U/ml 胶原酶的容器中,放于 37℃温箱中消化60 min,每隔15min 需摇动一次。
 
5. 用吸管将上清液的三分之二吸入离心管中,并加入含有胎牛血清的培养基终止消化。
 
6. 以1000  rpm 离心10分钟后,弃上清。
 
7. 将细胞沉淀用F-12 培养基制成细胞悬液,充分吹打并用不锈钢网(200目)过滤,再以1000 rpm 离心10分钟,弃上清。
 
8. 沉淀悬于含15% 胎牛血清和1 U/L牛 TSH的F-12 培养基中,台盼蓝染色证明活细胞数大于95%,调整细胞浓度接种于培养板中(1 ml/孔)。
 
9. 置于 37℃的5% CO2 孵箱中,每 2-3 天换液一次,至细胞融合成片后用于实验。
 
二、结果
猪甲状腺细胞培养 24 小时,镜下细胞贴壁,呈聚集生长,细胞呈圆形或椭圆形。
 
注意事项
1. 原代培养时,接种的细胞活性的好坏直接关系到培养的成败。
 
2. 组织热缺血时间短的组织的细胞活性好。取材后尽量不要耽搁时间,宜尽快处理并培养。
 
3. 对于仅为单纯独立的甲状腺腺瘤而质地较软的组织,因相对容易消化,消化时间可以适当缩短。
 
4. 镜下观察接种到培养瓶中的原代细胞,若大部分为5~10个相连的细胞小团,就容易生长。
来源:上海研生实业有限公司
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